一、实验背景:
花粉作为植物的雄配子体, 落到柱头上后, 通过萌发生长出花粉管, 将精细胞运至胚囊完成受精作用。花粉的萌发以及花粉管的生长是植物有性生殖过程中的重要事件, 常常将其作为研究植物细胞极性生长、分化以及信号转导的重要体系。
二、实验内容:
1. 离体培养最优培养基的筛选
以烟草花粉为材料,采用液体培养法研究培养基中钙离子、硼离子、PEG以及蔗糖浓度对百合花粉离体萌发生长的影响。
以蔗糖浓度为例:在液体培养基(0.99 mM KNO3, 0.08mM MgSO4, 0.162 mM H3BO3, 1.27 mM Ca(NO3)2, pH 5.6)中分别加入5%、10%、15%和20%四个不同浓度的蔗糖, 取一定量的花粉于上述液体培养基中28℃,100 rpm培养2个小时,然后将样品固定,统计分析不同浓度的蔗糖对花粉萌发和花粉管生长的影响,每个浓度重复3次,每重复随机观察3个视野,每视野观察花粉数不少于50粒,统计花粉萌发率;同时用显微测微尺测量花粉管长度 (μm),每视野随机测量10个花粉,每处理共测90个花粉管长度,计算其平均值。
数据采用Excel进行处理,采用SPSS进行显著性分析后将实验结果以图表的形式呈现, (参考例表-1)。
例表-1 不同浓度蔗糖对花粉萌发及生长的影响
2. 离体培养培养条件的优化
以烟草花粉为材料,采用液体培养法研究培养基的pH、培养温度和培养时间对百合花粉离体萌发生长的影响。
以培养时间为例:取一定量的花粉于液体培养基(10%蔗糖,0.99 mM KNO3, 0.08mM MgSO4, 0.162 mM H3BO3, 1.27 mM Ca(NO3)2, pH 5.6)中, 28℃,100 rpm培养,在1h, 1.5h, 2h, 3h, 4h, 6h, 8h这几个时间点分别取样固定,然后在显微镜下观察并统计分析花粉萌发和花粉管生长的情况。
数据采用Excel进行处理分析后将实验结果以图表的形式呈现(参考例图-1)。
三、思考题:
1. 选出烟草花粉离体培养最适合的培养基和培养条件。