实验教学

一．实验目的

生物化学是一门实验性学科，其所有知识均来自于实验。本课程着眼于学生学习和掌握生物化学课程的基本理论、基本知识以及实验技能，培养学生具有初步分析问题和解决问题的能力。

生物化学实验课通过学习比色、纸层析、电泳、荧光定量PCR、生化制备等基本实验技术，分析研究蛋白质、核酸、酶、维生素等生化物质及某些代谢过程，培养学生具有初步的科学实验能力及严格的科学作风，同时验证生物化学的某些基本理论知识，加深感性认识，并锻炼初步的综合实验能力。

二．实验内容

实验一 蛋白质和氨基酸的呈色反应

一、 实验目的

学习常用的鉴定蛋白质氨基酸的方法及其原理；学习几种特定氨基酸的特殊颜色反应及其原理。

二、实验内容

双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应。

实验二 蛋白质的沉淀、变性反应

一、 实验目的

了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系；学习盐析和透析等生物化学的操作技术。

二、实验内容

可逆沉淀反应，不可逆沉淀反应。

实验三 蛋白质浓度的测定（1）——Folin-酚法

一、 实验目的

学习Folin-酚法的原理及方法，制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。

二、实验内容

制备Folin-酚法标准曲线，测定未知样品蛋白质浓度。

实验四 蛋白质浓度测定（2）——紫外线吸收法

一、 实验目的

学习紫外线（UV）吸收法测定蛋白质含量的原理，了解紫外分光光度计的构造原理，掌握它的使用方法。

二、实验内容

标准曲线的绘制及未知浓度蛋白质溶液的测定。

实验五 氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法

一、 实验目的

了解氨基酸滤纸层析的原理及操作方法。

二、实验内容

进行氨基酸的纸层析及定性鉴定。

实验六 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

一、 实验目的

了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术，测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。

二、实验内容

进行血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳并进行结果判断。

实验七 维生素C的定量测定

一、实验目的

了解用2，6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量的原理及方法。

二、实验内容

用2，6—二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C的含量。

实验八 维生素B1、B2的定性鉴定

一、实验目的

了解维生素B1、B2的性质，掌握其定性检验方法。

二、实验内容

维生素B1、B2的定性鉴定。

实验九 荧光分光光度法测定核黄素含量

一、实验目的

学习荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的分析原理；掌握荧光分光光度计的操作技术和测定多维葡萄糖粉中维生素B2的方法。

二、实验内容

用荧光光度法测维生素B2的含量。

实验十 从动物组织中提取脱氧核糖核酸

一、 实验目的

学习和掌握用浓盐法从动物组织中提取DNA的原理和技术，了解分离提取DNA的一般原理。

二、实验内容

以猪肝为原料用不同浓度的盐溶液提取其中的脱氧核糖核酸。

实验十一 核酸浓度测定（1）——定磷法

一、 实验目的

掌握定磷法测定核酸含量的原理和方法。

二、实验内容

通过对总磷、无机磷的测定，计算未知样品中的核酸浓度。

实验十二 核酸浓度测定（2）——紫外吸收法

一、 实验目的

了解Eppendorf 蛋白质核酸分析仪的使用方法。

二、实验内容

利用核酸的紫外吸收性进行核酸的定量测定。

实验十三 血清谷丙转氨酶的测定（King氏法）

一、 实验目的

掌握血清谷丙转氨酶活力测定的原理和方法；进一步熟练标准曲线的制作和分光光度计的使用。

二、实验内容

用King氏法测定血清谷丙转氨酶的活性。

实验十四 细胞端粒酶活性测定（荧光定量法）

一、 实验目的

了解端粒及端粒酶的基本概念、掌握端粒酶检测的方法及原理以及熟悉实时荧光定量法的原理及基本操作过程。

二、实验内容

通过荧光定量PCR法检测鉴定样品中端粒酶活性。

实验十五 等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

一、 实验目的

了解等电聚焦的原理。通过蛋白质等电点的测定，掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直管式等电聚焦电泳技术。

二、实验内容

用等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点。

实验十六 实验综合测试

一、实验目的

考察学生掌握实验原理、实验设计、实验数据处理等综合分析的能力，公平打分，以检查整体教学效果。

二、实验内容

涵盖全学年实验课所学的全部内容，包括实验原理、实验操作及数据分析进行书面考核测试。

三．实验学时安排

第一学期实验

第二学期实验

备注：根据实际情况选做14至16个实验。

四．考试方式

每次实验上交实验报告，学期末根据上课实际操作、实验报告成绩、与实验综合测试成绩汇总平均分数，占《生物化学》总成绩的30%。

五、教材与参考书目

1．李建武等．《生物化学实验原理和方法》．北京大学出版社，2004

2.陈钧辉等．《生物化学实验》（第四版，国家精品课程配套教材）．科学出版社，2008

3.王冬梅等．《生物化学实验》（第一版，21世纪高等院校教材）．科学出版社，2009

执笔人： 雷蕾

审定人：马艳玲